中成药中对乙酰氨基酚含量测定的4种方法及比较

【关键词】 中成药

摘要：目的：运用4种含量测定方法测定中成药中对乙酰氨基酚的含量，并比较其精确度、回收率和适应性。方法：采用滴定法、双波长分光光度法、紫外吸收系数法及高效液相色谱法。结果：四种方法所测的含量有所不同。结论：用高效液相色谱法测定中成药中对乙酰氨基酚的含量，方法简便、准确、专属性强。

关键词：四种中成药;对乙酰氨基酚; 四种含量测定

Comparison of Four Methods for the Determination of　Paracetamol in Traditional Chinese Medicine

Abstract: Objective: Use four methods to determine paracetamol to comparison theirison accuracy, recovery and applicability. Methods: Determination of paracetamol in traditional Chinese medicine with titration. Two wave length spectrophotometry. Uv spectrophotometry and Hplc. Results: The results of four methods are not same. Conclusious: The Hplc method was accurate and specific to determine the content of paracetamol in traditional chinese medicine.

Key words: Four traditional chinese medicine；Paracetamol; Four content determination

对乙酰氨基酚又称扑热息痛，现其在中西结合治感冒制剂中普遍存在，而对其原料药含量测定方法主要有滴定法、紫外吸收系数法等［1］。但对其中中西结合制剂的定量方法还未见系统报道。本文采用滴定法、双波长分光光度法、紫外吸收系数法和高效液相色谱法分别测定四种中成药中对乙酰氨基酚的含量，并比较四种中成药中对乙酰氨基酚含量测定方法的优劣性，为中成药中对乙酰氨基酚的质量控制提供依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器：岛津UV?1601型紫外可见分光光度计（日本）、岛津LC?10AD型高效液相色谱仪（日本）、KQ?500型医用超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）、GR?200型电子天平（日本）。

1.2 试药：对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所）、感冒清片（20020102，广州巨虹药业有限公司）、复方感冒灵片（020202，广州山河药业科技有限公司）、999感冒灵颗粒（20020302，深圳三九医药股份有限公司）、维C银翘片（020402，深圳益生堂药业有限公司）均为笔者自购；HPLC流动相所用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 滴定法［2］：片剂（感冒清片、复方感冒灵片、维C银翘片）各取20片，除去糖衣，精密称定，研成细粉；感冒灵颗粒取10包，除去包装，精密称定，研成细粉。各精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚0.3g），照复方感冒灵片含量测定项下测定。

2.2　双波长分光光度法［3］

2.2.1 供试品液的制备 精密称取消2.1项滴定法片剂剩余细粉及颗粒剂剩余细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚50mg），分别加无水乙醇适量溶解至100ml量瓶中，超声处理5min，使充分溶解，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液1ml置100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀作为供试液。

2.2.2 对照品液的制备：取已干燥至恒重的对乙酰氨基酚对照品适量加无水乙醇制成每1ml含对乙酰氨基酚5µg的溶液作为对照品液。

2.2.3 阴性液的制备：按照中成药处方和制法除去对乙酰氨基酚制成阴性液。照分光光度法，在200～400nm波长处将供试品液、对照品液和阴性液扫描，并在249nm和289nm（复方感冒灵片在249nm和341nm）波长处测定吸收度。根据双波长法的选择原则：①ΔA必须足够大（ΔA≥0.35）；②λ1和λ2两个波长中必须有一个波长是最大吸收波长；③阴性部分（或叫干扰组分）在λ1和λ2波长处的吸收度相等或相差甚微（即Aλ1阴性=Aλ2阴性）。可以看出，感冒清片不能采取双波长法，感冒灵颗粒、维C银翘片、复方感冒灵片均可采取双波长法，其中感冒灵颗粒和维C银翘片所选的波长为249nm和289nm，但复方感冒灵片不能选择289nm作为测定波长，因为干扰组分在249nm和289nm的吸收度不相等，而干扰组分在249nm和341nm的吸收度相差甚微，可选择249nm和341nm作为测定波长。分别求出供试液和对照液在两个波长吸收度差值ΔA供试品、ΔA对照品（ΔA=Aλ249nmAλ289nm或ΔA= Aλ249nmAλ341nm），按下式计算每片（或每包）中对乙酰氨基酚的含量相当于标示量的百分值（结果见表1）。百分值＝ ΔA供试品×对照品浓度×平均片重(或平均包重) ×100%ΔA对照品×取样量×稀释体积比×每片(或每包)标示量

表1 四种检验方法测定对乙酰氨基酚含量结果比较（略）

2.3 紫外吸收系数法［1］

2.3.1 供试液的制备：精密称取2.1项滴定法片剂剩余细粉适量及颗粒剂剩余细粉适量(约相当于对乙酰氨基酚40mg),分别置250ml量瓶中,加0.4%NaOH溶液50ml及水50ml,超声处理15min,加水至刻度,摇匀,用干燥滤纸滤过,弃去初滤液；精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液10ml，加水至刻度，摇匀作为供试品液。以相应的试剂为空白。照分光光度法，在257nm波长处测定吸收度，按对乙酰氨基酚的吸收系数为（E1m）715计算。

2.3.2 阴性液的制备：按各中成药处方和制法除去对乙酰氨基酚制成阴性液。照分光光度法，在257nm波长处测定吸收度。结果感冒清片、复方感冒灵片、维C银翘片均有干扰，不能使用此法，但感冒灵颗粒干扰较微，可使用此法。

2.4 高效液相色谱法［4］：色谱条件与系统适用性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇?水（35:65）为流动相，检测波长为249nm。

2.4.1 对照品溶液的制备：精密称取在105℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚对照品10mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释置刻度，摇匀作为对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备：精密称取2.1项滴定法片剂剩余细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚12mg），置50ml量瓶中，加甲醇35ml，超声处理10min，取出，放置室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，离心备用。

2.4.3 阴性液的制备：按各中成药处方和制法除去对乙酰氨基酚制成阴性液。精密量取对照品液、供试品液和阴性液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算供试品中对乙酰氨基酚的含量（结果见表1）。可以看出，四种中成药阴性组分干扰甚微，因而均可采用高效液相色谱法。

2.5 回收率考察：精密称取已测知含量的感冒灵颗粒细粉适量（按上述4种方法取样量）各5份，分别加入适量已恒重的对乙酰氨基酚对照品，依照4种方法分别测定计算对乙酰氨基酚的含量（结果见表2）。

表2 四种检验方法加样回收率结果比较（略）

3 讨论与分析

3.1 本实验所用的器皿、对照品必须经过干燥以除去水分影响，环境相对湿度亦应控制较低，否则会使测定结果偏高。

3.2 滴定法虽不用对照品，但使用外指示剂，终点难以控制，误差稍大且使用外指示剂过程中损失少量成分致使含量和回收率均偏低，应予淘汰，不再使用。

3.3 紫外吸收系数法虽无需对照品，但大部分中成药制剂有干扰不能使用此法且回收率偏高，测定值亦稍微偏高，故此法不太适用于复方中西结合制剂含量测定，但此法适合较纯的西药原料及制剂的测定。

3.4 双波长分光光度法不经分离样品即可直接测定含量，方法简便、快速、可排除干扰，适合大多数中西结合制剂含量测定。但个别中西结合制剂比如感冒清片不能使用此法。

3.5 高效液相色谱法干扰甚微，结果准确。

综上所述，对于中成药中对乙酰氨基酚的含量测定，最佳的定量方法是高效液相色谱法。

参考文献：

［1］中国药典（二部）［M］.2000．206．

［2］卫生部药品标准．中药成方制剂（第12册）［M］.1996．130．

［3］卫生部药品标准．中药成方制剂（第20册）［M］.1996．324．

［4］卫生部药品标准．中药成方制剂（第19册）［M］.1996．229．