蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠模型细胞因子的影响

【摘要】目的：观察蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠关节炎指数（AI）、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的影响，探讨蠲痹汤治疗类风湿关节炎的免疫机制。方法：将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤对照组、蠲痹汤高/低剂量组，制备类风湿关节炎大鼠模型，给药组以不同剂量蠲痹汤灌胃，对照组代以生理盐水，检测AI、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的表达。结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显上升，IL-10、IL-4水平明显下降（P

【关键词】蠲痹汤；类风湿关节炎；大鼠模型；细胞因子

【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）14-0001-02

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）属难治性疾病，临床多采用化学药物或生物制剂进行治疗，但疗效不稳定。蠲痹汤出自清代程国彭所著《医学心悟》，由独活、桂心、秦艽、当归、川芎、炙甘草、海风藤、桑枝、乳香、木香组成，具有祛风除湿、益气活血、蠲痹止痛等功效，是临床治疗类风湿关节炎的常用方剂，疗效显著[1-3]。为探讨其作用机制，本研究通过制备类风湿关节炎大鼠模型，以血清细胞因子为观察指标，观察蠲痹汤对类风湿关节炎的免疫调节作用，为进一步研究蠲痹汤治疗类风湿关节炎的作用机制提供实验依据。

1材料与方法

11实验动物Wistar大鼠50只（180±20）g（雌雄分笼），由贵阳医学院实验动物中心提供[许可证号：SCXK（黔）2002-0001]。

12药材与试剂蠲痹汤：按原方比例常规方法制备水煎剂，调整浓度为01g生药/ml，滤过除菌，置4℃备用；甲氨喋呤（上海华联制药有限公司）；完全福氏佐剂（Sigma公司）；大鼠细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-4检测试剂盒（上海拜力生物科技有限公司）。

13仪器EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）。

2实验方法

21动物分组动物购回适应性饲养1周后，随机分为2组。正常对照组大鼠10只；模型组大鼠40只，造模后又随机分为模型对照组、甲氨喋呤对照组、蠲痹汤高剂量组、蠲痹汤低剂量组，每组10只。

22大鼠类风湿关节炎模型的制备[4]模型组大鼠左后足跖皮内注射完全福氏佐剂，01ml/只，建立佐剂性类风湿关节炎大鼠病理模型。

23给药方法造模后第7d，甲氨喋呤对照组按12mg/kg灌服，1次/d，连续2周；蠲痹汤高、低剂量组分别按22g/kg、11g/kg灌服，1次/d；正常对照组和模型对照组灌服等量生理盐水，每天一次，连续给药2周。

24关节炎指数（arthritis index，AI）的计算[5]大鼠致炎后第12d开始观察并记录关节病变程度，每4d1次，病变按5级分法评价，根据未注射佐剂的余下肢体的病变程度累计积分，计算出AI。0分：无红肿；1分：小趾关节红肿；2分：趾关节和足趾肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累计起来，即为每只大鼠的AI。

25指标检测末次灌胃12h后开始禁食（不禁水），24h后股静脉取血，分离血清，细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的检测均按试剂盒说明书操作。

26统计分析数据分析采用SPSS170软件进行，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，P

3结果

31对类风湿关节炎大鼠关节炎指数的影响由表1可知，致炎后16d，蠲痹汤高剂量组大鼠关节炎指数显著低于模型对照组（P

32对类风湿关节炎大鼠血清细胞因子水平的影响由表2可知，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β水平明显上升，IL-10、IL-4水平明显下降，差异有统计学意义（P

4讨论

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种累及周围关节为主的多系统性自身免疫性疾病，属于中医学“痹证”范畴。多因风寒湿热等外邪侵袭人体，闭阻经络，气血运行不畅所致。本病较为常见，且是顽固的慢性关节炎症性病变，常侵犯四肢小关节，可引起全身的关节肿胀疼痛及功能障碍，并可伴有关节外的系统性损害，是致残性疾病之一。临床上多采用化学药物或生物制剂进行治疗，但其毒副作用明显、患者难以长期耐受，且疗效不稳定。近年来，用中医中药辨证治疗类风湿关节炎取得很好疗效。蠲痹汤源自《医学心悟》，由独活、桂心、秦艽、当归、川芎、炙甘草、海风藤、桑枝、乳香、木香组成，是治疗类风湿关节炎常用方剂，疗效显著。

研究表明，在RA的发病过程中，细胞因子的失调占有重要的地位，TNF-α、IL-1β主要由单核细胞及巨噬细胞分泌，使外周血和关节滑液中IL-1β和TNF-α升高。IL-1β和TNF-α是炎症、组织损伤及免疫反应的主要介质，在RA的发病机理中居中心地位，参与RA的发生发展过程，二者相互协调、促进，在多数情况下表现协同性生物学效应[6]。表达的IL-1β和TNF-α可刺激滑膜细胞和软骨细胞产生基质金属酶、胶原酶等，导致滑膜炎症和软骨破坏，同时可激活破骨细胞，使骨质溶解[7]。IL-4和IL-10是两种抗炎症的Th2型细胞因子，可负调节抗原提呈细胞的功能，抑制Th1增生，抑制IL-1β、TNF-α和其他一些炎症性细胞因子的功能和生成。IL-10、IL-4在RA病变中含量明显降低。实验和临床观察证实，纠正促炎症细胞因子和抗炎症细胞因子的平衡失调状态，可以缓解或阻止关节炎症的发生和发展[8]。

本研究结果显示，致炎20d后，与模型对照组比较，蠲痹汤高、低剂量均能显著降低实验大鼠关节炎指数（P005），表明蠲痹汤能抑制大鼠RA的继发病变。与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显升高，IL-10、IL-4水平明显降低（P

佐剂性关节炎动物模型与人类RA有较高的相似度，利用该模型对RA治疗药物筛选具有重要的应用价值。本实验采用佐剂性关节炎症动物模型进行研究的结果表明：蠲痹汤对佐剂性关节炎大鼠足关节病变有显著抑制作用，其临床治疗类风湿关节炎的机制可能与其调节炎性细胞因子的产生、调节机体免疫有关。

参考文献

[1] 王建文.蠲痹汤治疗类风湿性关节炎60例[J].吉林中医药，2003，23（12）：26.

[2] 史成和，关晓旭.和血蠲痹汤治疗类风湿性关节炎90例[J].陕西中医，2004，25（7）：614-616.

[3] 肖一公. 自拟祛风蠲痹汤治疗类风湿性关节炎疗效观察[J].中医药临床杂志，2007，19（4）：319-320.

[4] 周军，方素萍，齐云，等.桂枝汤对大鼠佐剂性关节炎的防治作用研究[J].中药药理与临床，2000，16（6）：319-323.

[5] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学（第三版）[M].北京：人民卫生出版社，2002.

[6] 李霞，孙健，范成明.细胞因子与类风湿关节炎[J].大连大学学报，2000，21（4）：102-105.

[7] Miossec P1，van den Berg W.Th1/Th2 cytokine balance in arthritis[J].Arthritis Rheum，1997，40（12）：2105-15.

[8] Neurath MF，Hildner K，Becker C，et al.Methotrexate specifically modulates cytokine production by T cells and macrophages in murine collagen-induced arthritis （CIA）： a mechanism for methotrexate-mediated immunosuppression[J].Clin Exp Immunol 1999，115（1）：42-55.

（收稿日期：2015415）