胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺研究

[摘要] 目的 优选胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺。 方法 以胎乐颗粒中黄芪甲苷含量和浸膏得率为评价指标，对提取次数进行考察，选择加水量、浸泡时间和煎煮时间为考察因数，用正交试验优选胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺。 结果 黄芪甲苷的最佳提取条件是第1次加10倍量水，提取时间120 min；第2次加8倍量水，提取时间90 min。 结论 本方法简便、准确、重现性好，可为胎乐颗粒中黄芪甲苷提取工艺的确定提供实验依据。

[关键词] 胎乐颗粒；黄芪甲苷；提取工艺；正交设计

[中图分类号] R284.2[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）03（a）-0107-02

胎乐颗粒系我院中医科经验方，具有补气固肾、健脾滋阴、养血安胎的功效[1]，该方中黄芪为君药，黄芪甲苷为主要成分，药理研究证明黄芪甲苷具有扶正抗衰、抗病毒、增强免疫功能的作用[2-3]。黄芪中含有黄芪多糖、黄芪甲苷和多种氨基酸[4-5]，为了节约能源和保护环境，目前黄芪甲苷的主流提取方法为水煎煮[6-7]，因此，本试验选用水为提取溶媒，利用正交设计考察黄芪甲苷的提取工艺[8-9]，以确定其最佳提取方案。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（安捷伦），蒸发光散射检测器（美国奥泰），电子分析天平（梅特勒），黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所，批号：110781-200511），超声清洗器（宁波新芝），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；黄芪等药材均购自湖南省岳阳天香中药饮片厂，经湖南省妇幼保健院药剂科戴子启教授鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 测定黄芪甲苷的提取量

2.1.1 制备对照品溶液精密称取对照品适量，并用甲醇溶解制成含黄芪甲苷500 μg/mL的对照品溶液，即得。

2.1.2 制备样品并测定将胎乐颗粒提取液浓缩、干燥，取适量用水溶解，用饱和的正丁醇溶液提取，氨试液洗涤，取正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤，取正丁醇液并蒸干，用甲醇适量使残渣溶解，移至容量瓶中，根据每次实验中黄芪甲苷的浓度不同，稀释至适当浓度，摇匀并过滤，用HPLC法进行测定。

2.1.3 色谱条件色谱柱：依利特 Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为水：乙腈（65∶35），柱温为43℃；流速为1.5 mL/min，检测波长为342 nm。

2.1.4 线性关系的考察制成含黄芪甲苷0.504 mg/mL的对照品溶液，并精密吸取3、6、12、16、20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以进样量（μg）的对数值为横坐标（X），以黄芪甲苷峰面积的积分值的对数值为纵坐标（Y），制成标准曲线。其回归方程为：Y = 2.790 8+1.501 9X（r = 0.999 3）。结果表明，黄芪甲苷对照品在10.080～1.008（μg）范围内有良好的线性关系。

2.1.5 浸膏得率的测定处方各提取液精密量取30 mL，并置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干并于105℃干燥至恒重，冷却后精密称重，即得。

2.1.6 提取次数的选择试验按处方配比（1∶50）称取药材，加水浸泡30 min，加水量分别为药材的10、8、8倍量，提取时间分别为120、90、90 min，合并收集的第1、2次提取液，定容；再收集第3次提取液，定容，分别测定第1、2、3次提取液的浸膏得率和黄芪甲苷的提取量，结果显示，黄芪药材中黄芪甲苷含量为0.076%。提取次数对浸膏得率及黄芪甲苷提取量的影响，见表1。

由表1可见，以浸膏得率为考查指标，第3次提取的浸膏得率所占比例为9.91%；以黄芪甲苷提取量为考查指标，第3次提取的黄芪甲苷所占比例为8.80%，说明两次提取已基本提取完全，故采用了提取两次的工艺。

2.2 正交试验优选提取工艺

2.2.1 实验设计对工艺条件采用正交试验进行优选，在确定提取次数的基础上，以浸泡时间、加水量、提取时间作为考察因素。所选的因素水平方案，见表2。

2.2.2 实验方法与结果取处方配比（1∶50）称取药材，照正交试验表（表3）的安排，加水浸泡，加热提取，分别收集两次提取液，合并、定容，分别测得浸膏得率和黄芪甲苷提取量，并以浸膏得率和黄芪甲苷提取量为考查指标。L9（34）正交试验设计及结果，见表3。

2.2.3 数据分析①以浸膏得率为考查指标：由表3中极差R值大小显示，各因素作用主次为A>C>B，方差分析结果表明：C因素与A因素的影响均具有统计学意义（P < 0.05），B因素的影响无统计学意义（P > 0.05），以A1B3C1组合为佳；②以黄芪甲苷提取量为考查指标：由表3中极差R值大小显示，各因素作用主次为C>A>B，方差分析结果表明：A因素的影响有统计学意义（P < 0.05），C因素的影响有高度统计学意义（P < 0.01），B因素的影响无统计学意义（P > 0.05），以A2B2C2组合为佳。考虑到黄芪甲苷提取量这一指标较为重要，且浸膏得率中A2与A1相差不大，同时从大生产中节能省时考虑，故选择A2B1C2为最佳工艺，即第1次加水10倍量，煎煮120 min；第2次加水8倍量，煎煮90 min。这一方案与正交表中黄芪甲苷浸出量最高的4号方案一致，表明其合理可行见。见表4、5。

3 讨论

黄芪甲苷的含量测定目前主要有薄层扫描法[10]、高效液相色谱法，由于薄层扫描法重复性较差，精密度不高，笔者采用高效液相色谱法测定（黄芪甲苷在200 nm附近有末端吸收），这样测出来的结果重复性好，精密度高。

本文通过正交试验对胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取方法进行了研究，确定了黄芪甲苷的水提的最佳工艺，使处方中有效成分可以达到最大限度的提出，为胎乐颗粒的工艺研究提供了最可行的提取工艺。

[参考文献]

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[9]廉丽，张铭，马丽颖.增生颗粒正交试验优选最佳提取工艺[J].中华中医药学刊，2009，27（2）：430-431.

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（收稿日期：2011-09-06本文编辑：卫 轲）