胃癌患者EB病毒感染与Cyclin D1基因表达的相关性

【关键词】 胃癌患者

Relativity between EBV infection and expression of Cyclin D1 in gastric carcinoma patients

【Abstract】 AIM：To investigate the relativity between the EpsteinBarr Virus (EBV) infection and the expression of Cyclin D1 in gastric carcinoma （GC） patients. METHODS: EBER1 in 217 cases of GC was detected with in situ hybridization. Then, EBV positive and negative GC cases were selected for analysis of the expression of Cyclin D1 by immunohistochemistry. RESULTS: In 217 GC cases there were 23 cases with EBER1 positive expression. The expression of Cyclin D1 was higher in the EBV positive GC than that in the EBV negative (P＜0.01）. CONCLUSION: EBV infection in GC may upregulate the expression of Cyclin D1.

【Keywords】 herpesvirus 4,human； stomach neoplasm； oncogene protein

【摘要】 目的: 研究胃癌患者癌组织中EB病毒（EBV）感染与Cyclin D1表达的关系. 方法: 原位杂交法检测胃癌患者石蜡标本中EBV编码的小RNA（EBER1）；免疫组化法检测EBV阳性胃癌［EBV（+）］ 及EBV阴性胃癌［EBV（-）］标本细胞周期蛋白Cyclin D1的表达状况. 结果: 胃癌患者癌组织标本217例中23例EBER1（+）； EBV（+）组Cyclin D1蛋白表达显著高于EBV（-）组(P＜0.01). 结论: EBV感染可能上调Cyclin D1表达.

【关键词】 疱疹病毒4型，人；胃肿瘤；癌基因蛋白质类

0引言

EB病毒(EBV)可诱发癌基因突变导致肿瘤的发生.如鼻咽癌、机会性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤等.有研究认为，EBV感染与胃癌的发生密切相关,但机制未明.我们探讨唐山地区EBV感染与胃癌患者细胞周期素Cyclin D1表达的相关性如下.

1材料和方法

1.1材料2001/2003唐山市工人医院胃癌手术切除标本130例；唐山市开滦医院胃癌手术切除标本47例，遵化市人民医院（2003）胃癌手术切除标本21例，华北煤炭医学院附属医院（2004）胃癌手术切除标本19例. 标本HE染色后行组织病理学观察并做出诊断.同时取相应癌旁组织作对照.

1.2方法采用美国PanPath公司生产的EBER1原位杂交试剂盒进行原位杂交： 石蜡切片经二甲苯脱蜡,乙醇梯度水化,胃酶消化后,与地高辛标记的EBER1寡核苷酸探针（地高辛标记的EBER1寡核苷酸探针，包括antisense探针：5′AGACACCGTCCTACCACCCGGGACTTGTA3′；sense探针：5′TCTGTGGCAGGAGTGGTGGGCCCTGAACAT3′）进行杂交反应,洗去剩余探针,用碱性磷酸酶标记地高辛抗体孵育，NBT/BCIP液显色, 甲基绿复染,中性树胶封片, 镜检观察. EBER1（+）细胞核呈深蓝色，在核内及核仁中均可见EBER1表达，而EBER1（-）细胞不着色呈甲基绿复染的颜色．采用Power VisionTM二步法免疫组化法,检测Cyclin D1蛋白的表达. 使用的Cyclin D1 鼠抗人mAb购自北京中山生物技术有限公司. 在染色切片上于细胞核见到均匀棕黄色颗粒分布判为阳性（+），阴性结果不显色，经苏木精复染后，细胞核显示复染的蓝色；对每例切片随机地在100倍显微镜下取10个视野, 录入GD6多媒体彩色图像分析系统，测定Cyclin D1蛋白表达的平均面积(average area, AA)、平均光密度(mean optical density, MOD)、积分光密度(integral opticaldensity，IOD)值.

统计学处理: 以Excel建立数据库，应用SPSS 11.0统计分析软件进行统计学分析；计量资料以x±s表示，组间计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验. P＜0.05认为差异有统计学意义.

2结果

2.1BEER1原位杂交EBER1阳性信号几乎表达在所有癌细胞中，阳性信号表达有的可见癌细胞核，核仁；而EBER1（-）细胞不着色呈复染的绿色（图1）．217例胃癌组织标本检测到23例EBER1（+），阳性率为10.6%；相应癌旁组织均未检测到EBV感染，二者EBER1阳性率有差异(χ2=24.2, P＜0.01).

2.2免疫组化染色Cyclin D1（+）细胞在染色切片上于细胞核呈棕黄色颗粒，阴性结果不显色，经苏木精复染后，细胞核呈复染的蓝色（图2）．23例EBV（+）标本有Cyclin D1表达21例（91.3%），194例EBV（-）标本有Cyclin D1表达160例（82.5%），两者相差显著(P＜0.01，表1). 表1胃癌组织中Cyclin D1表达（略）

3讨论

在EBV与胃癌相关性研究中，认为胃癌细胞内存在EBER1者为EBV（+）．本研究217例癌组织标本，有23例癌组织细胞核内及核仁中有EBER1（+），而癌旁正常组织无EBER1表达，提示EBV感染与胃癌发生有密切关系．EBV感染发生在胃癌形成早期，感染EBV的肿瘤细胞单克隆增生，从而导致EBV（+）组织中几乎所有癌细胞均有EBER1表达．

大量研究资料证实［1-4］在生理状态下，细胞进入S期后，Cyclin D1迅速分解.如果Cyclin D1基因激活，Cyclin D1持续高表达，将导致G1期缩短，提前进入S期，使细胞增殖失控，最终形成肿瘤；并且Cyclin D1在差分化型胃癌中的阳性表达率明显高于分化型，即胃癌的分化程度越差，Cyclin D1表达越高，细胞增殖越快．在胃癌发展不同阶段Cyclin D1表达随胃癌恶性程度的增强，基因的异常表达有增强的趋势，提示Cyclin D1在胃癌的发生、发展及癌变过程中起重要作用．本研究中，23例EBV（+）胃癌癌组织Cyclin D1表达阳性21例，Cyclin D1（+）率为91.3%，EBV（-）组阳性率为82.5%；免疫组化图像分析结果显示, EBV（+）中Cyclin D1蛋白的AA、MOD和IOD均显著高于EBV（-）组；提示EBV感染可能导致Cyclin D1蛋白高表达，使细胞周期失控，导致肿瘤的发生．Dittmer等［5］报道，某些病毒能在宿主细胞主动编码内源性cyclin，称为病毒编码的cyclin（vcyclin）, vcyclin不仅有宿主细胞G1期cyclin的特点，而且能使细胞周期失调, vcyclin表达可逆转很多细胞因子引起的G1期阻滞，甚至促进G0期细胞进入细胞周期. vcyclin与细胞周期调节因子之间可能有相互作用，与病毒的生存和宿主细胞分裂、分化及恶性转化密切相关．可以推测，EBV感染宿主细胞后，EBV编码的Cyclin D1与宿主细胞内源性Cyclin D1同源，引起胃黏膜上皮细胞Cyclin D1高表达，使细胞周期异常，导致肿瘤的发生与发展．

【参考文献】

［1］ 周斌，胡晓莺，张潍，等. 小鼠前胃癌变黏膜中EGFR, Cyclin D1,VEGF表达的相互关系［J］. 第四军医大学学报，2003, 24（11）：990-992.

［2］ 吴继锋, 绍晋晨,王道斌,等. 细胞周期调控因子在胃癌组织中的表达及意义［J］.癌症,2005,24(2): 175-179.

［3］ 刘红，刘倩，王文奇. 胃癌组织中CyclinD1和VEGF的表达及意义［J］. 实用肿瘤杂志，2004, 19（1）：27-29.

［4］ 杨玉珍,黄曼玲,李小兰,等.细胞周期蛋白在胃肠癌中的表达及临床意义［J］.胃肠病学和肝病学杂志，2005, 14（4）：394-397.

［5］ Dittmer DP. Transcription profile of Kaposis sarcomaassociated herpesvirus in primary Kaposis sarcoma lesions as determined by realtime PCR arrays［J］. Cancer Res，2003，63(9): 2010-2015.