三七有效成分含量测定的研究进展

关键词：三七；有效成分；含量测定

中图分类号：R927.2

文献标识码：A

文章编号：1007―2349(2007)06―-0041―03

三七又名田七，为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk)F.H .Chen的干燥根，具有散瘀止血、消肿镇痛等功效，历版药典均有收载。现代药理研究表明，三七具有增强机体功能、增加冠脉血流量、扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降低血粘度等作用；对三七的现代药学分析表明，人参皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1是三七的主要有效成分，对三七药材或以三七为主药的药品进行质量控制时，多采用测定以上几种有效成分含量的方法。近年来随着中药现代化的要求和药物分析手段的提高，对三七有效成分含量测定的方法有了新的变化，现总经如下。

1三七中药材有效成分含量测定的研究进展

1.1高效液相色谱法近年来，高效液相色谱以其快速、高效、分离效能高、重现性好、结果准确可靠等优势，被广泛应用于三七药材的含量测定。其中流动相多采用梯度洗脱；在线检测方法多以测定样品的紫外吸收为主；检测波长多为203nm；检测对象主要是样品中的人参皂苷R1、人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1等有效成分。但从文献来看，对三七药材有效成分的提取方法各有不同，采用的色谱柱变化较多，因梯度洗脱方法存在检测时间过长的缺点(检测时间从25min到60min不等)，因此也有用非紫外检测器的方法。

1.1.1以人参皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1为指标、流动相梯度洗脱、在线紫外检测的高效液相色谱法2005版《中国药典》(一部)改变了2000版中薄层扫描法测定三七有效成分含量的方法，以高效液相色谱法测定有效成分含量。该方法主要是用流动相梯度洗脱的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈(A)：水(B)，检测波长为203nm。流动相梯度变化如表l。

药典方法中选用的对照品为人参皂苷Rm、人参皂苷Rb，和三七皂苷R1。供式品制备方法：取药材粉末(过4号筛)0.6g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过、取续滤液，即得。

王雁也采用了梯度洗脱的方法对不同商品规格三七进行了含量测定。色谱条件为：Luna c18(4.6min×250mm，5／μm)色谱柱；流动相乙腈(A)：0.05％磷酸(B)；流速：1.0ml・min-1；检测波长：203mm，如表2。

该方法选用的对照品为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1。采用超声法提取三七：精密称取三七细粉(过80目筛)约0.5g,加入甲醇50ml,超声波(50Hz)提取30min，过滤。

刘华钢采用的流动相梯度洗脱高效液相色谱法测定三七中有效成分的方法中，其色谱条件为：Shim pack VP―ODS(15cruX6.0mm，5μm)色谱柱；柱温：室温；检测波长：203nm；流速：1.　ml・min-1；仪器：HP1100系列高效液相色谱仪。选用的对照品为人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、三七皂苷Rb1和三七皂苷R1.该实验对三七的提取方法、提取溶剂、提取条件等均作了研究，认为以70％乙醇为溶剂、50倍超声提取粗粉2次，每次30min效果最好。该实验还比较了HPLC法和2000版《中国药典》收载的TLCS法(薄层扫描法)，认为2种方法所得结果差异不显著，但HPLC法具有灵敏度高、快速准确、专属性强、重视性好等特点。

李性天以高效液相色谱梯度洗脱法测定了三七中三七皂苷R1的含量。其色谱条件为：岛津LC―10AT高效液相色谱仪；Sphericorb NH2(150mm×4.6mm)色谱柱；NH2预柱；流动相：A(乙腈)：B(甲醇：水，2；1)；B相浓度梯度；0min：30％；0.1min：45％；10.0min：30％；15.0min：30％；15.1min：45％；25.0min：30％；25.1min：stop。检测波长：210nm；流速：0.8ml・rain-1；柱温：40℃；对照品：三七皂苷R1。该实验对三七的提取方法较简单，向精密称定的三七中加入甲醇适量溶解即可。

1.1.2以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1为指标，流动相比例固定不变、在线紫外检测的高效液相色谱法宋茹应用高效液相色谱法对三七药材、三七总皂苷、三七总皂苷的水溶液进行了指纹图谱的研究，采用的色谱条件是：仪器：LC―6A高效液相色谱仪、SPD―6AV紫外检测器、c―R4A数据处理器(日本岛津公司)；Kromasil C18,(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：乙腈：0.05％磷酸水溶液(32：68)；检测波长：203nm；流速：1.0ml・min-1；柱温：40℃；进样量：10μl。对照品：三七总皂苷。对三七药材的提取采用了加热回流提取的方法：取2.0g三七药材粉末(过3号筛)，置250mi烧瓶中，加乙醚50ml，置水浴上加热回流1h。弃去乙醚并挥干，再将粉末置烧瓶中，加甲醇50ml，置水浴上挥于甲醇。残留物加水50ml，摇动使溶解，过0.45／zm微孔滤膜，精密吸取滤液5mi，置25mi量瓶中，加水至刻度即得。

1.1.3以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1为指标，流动相梯度洗脱、非紫外检测的高效液相色谱法 沙旭东未使用在线紫外检测器，而是采用了蒸发光散射检测器(ELSD)与高效液相色谱仪连接进行检测。实验者认为蒸发光散射检测器由于流动相在检测前即以蒸发，可以提高基线的稳定性。色谱条件：仪器：Waters高效液相色谱仪、Alltech2000型蒸发光散射检测器Diamonsil C18(4.6min×150mm，5μm)色谱柱；流动相：乙腈(A)：水(B)，梯度洗脱：流速0.6ml・rain-1；ELSD检测器漂移管温度105℃载气流速

2.9L.min-1，如表3。

对照品：三七总皂苷。三七药材提取采用加热回流提取的方法：取0.4g三七药材粉末(过3号筛)，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流1h，弃去乙醚并挥干，置于索氏提取器中，加甲醇适量，加热提取至甲醇无色。取甲醇提取液挥干，残渣加甲醇溶解，定量转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度。

1.2非高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等有效成分由于HPLC―UV法多采用短波长(203nm)检测，很多化合物或溶剂都对检测有干扰，因此也有学者进行了其他方法的探索。万建波在对三七中皂苷类成分测定时，采用了加压溶剂提取一高效薄层色谱扫描法。该方法以甲醇为溶剂，提取温度150℃，压力6.895×103mPa，提取时间15min,循环提取1次。提取后采用高效薄层板、自动点样器、自动展开仪结合光密度扫描仪，采用正丁醇：乙酸乙酯：水(1：1：2，上层)为三七皂苷薄层分离的展开剂，对三七中人参皂苷Rg1、Rb1、Rd和三七皂苷R1进行分析。

1.3紫外分光光度法测定三七中黄酮的含量崔秀明认为三七中还含有黄酮成分，三七黄酮与皂苷合用生理活动性最强，并对三七不同采收时间和不同产地的总黄酮含量进行了分析，研究方法是采用紫外分光光度法，在249nm处测定槲皮素的含量。

2　含三七成分制剂中三七有效成分的含量测定

同三七药材类似，以三七为主药的制剂中，多采用高效液相色谱法对三七有效成分进行含量测定。但由于制剂中所含成分复杂，因此提取方法和药材提取方法略有不同：片剂、胶囊剂多先去除样品中与检测无关的杂质以减少干扰，再提取其中的有效成分；注射剂因有效成分纯度较高，因此可以不提取，直接稀释即可。三七为中药独圣活血片的主药，徐愚聪,采用高效液相色谱法同时测定独圣活血片中人参皂苷Rg-、Rb1。色谱条件：Shim pack ODS(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相乙腈：0.05％磷酸(1：4)；检测波长：203nm流速：1.0ml・min-1；柱温：35℃；供试品溶液制备；取独圣活血片，去糖衣，研细，精密称取1.5g，加石油醚30ml浸渍过夜，弃石油醚，残渣加醇20ml，加热回流1h，滤过，转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液为供试品溶液。提取时用石油醚浸渍样品粉末过夜可减小杂质峰对测定峰的干扰。对照品：人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1。赵祥军对以三七为君药的复方鳖甲软肝片进行了质量标准研究，建立了大孔吸附树脂小柱一高效液相色谱法同时测定样品中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1含量的方法。色谱条件：SUPELCOSILTMLC―18分析柱4.6mm×250mm流动相甲醇：水(50：50)；流速1.0ml・min-1；检测波长203nm；柱温30℃。在对有效成分提取时，先用氯仿、石油醚处理去除其中的脂溶性成分，再用大孔吸附树脂去除糖类及蛋白质、鞣质等损害色谱柱的成分。提取方法如下；取研细的药片粉末2.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，加氯仿40ml加热回流3h，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，密塞，超声处理30min，滤过，甲醇液挥干，加水10ml使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2次，10ml／次，弃去醚液，水液通过D101型大孔吸附树脂小柱，以水10ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇10ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用80％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液10ml，置10ml量瓶中，加80％乙醇至刻度，摇匀即得。何夏秋用高效液相色谱法，以Zobax一氨基柱为固定相，甲醇：乙腈：0.18mol・L-1的醋酸水溶液(36：90：5)为流动相，检测波长为205nm，测定了以三七为君药的益尿通胶囊中人参皂苷Rg1的含量。在对样品的提取方法上，实验者考察了超声1h、回流1h、冷浸24h三种方法，认为以超声提取法最好。具体如下：取样品1.0g，精密称定，加甲醇60ml，超声提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，超声下分3～4次使溶解，合并溶出液，定量转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，合并乙醚液，以水10ml洗涤2次，弃去乙醚液，洗出液并入水溶液中，挥尽乙醚后，以水饱和正丁醇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用10％的氨水溶液洗涤2次，每次20ml，每次20ml，再用水洗涤至中性，合并洗涤液，以水饱和正丁醇，再回提1次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀，用针筒式微孔滤器过滤，取续滤液为供试品溶液。检测以三七药材有效成分制成的注射剂时，因三七有效成分已经经过提取纯化，检测时提取方法相对简单，甚至直接稀释即可供检验用。宋茹_5]、沙东旭在检测血塞通注射液中三七有效成分时，均精密吸取样品注射液1ml，置50ml量瓶中，分别加入水或甲醇至刻度即得。王晓强考察了加水直接稀释、大孔吸附树脂处理、以水饱和正丁醇萃取三种提取方法，认为三种制备方法的结果无任何区别，而加水直接稀释操作最为简便。

3展望

作为中国传统医药中的一个重要品种，近年来三七的种植、加工、现代药理学研究、应用等工作已经形成一个巨大的产业，其应用、开发、研究有着十分诱人的前景，正越来越被人们所重视。而对三七药材及制剂中有效成分的分析为这一产业的发展提供了重要的技术支持并对行业发展起着积极的推动作用，虽然目前的检验方法中，有效成分的提取方法变化较多，实验者往往仅对某一实验展开研究，还缺乏具有广泛性的提取法；有关三七有效成分的指纹图谱研究的资料也不多见，但随着药物分析手段的日益更新，可以预见，会有更多快速、灵敏、准确的分析方法出现。