羚羊清肺颗粒中冰片的含量测定

[摘要] 目的 制订羚羊清肺颗粒中冰片的含量测定方法。 方法 采用《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ E规定的气相色谱测定方法：色谱柱：HP20M（30 m×0.32 mm×1.0 μm）（PEG20M）；柱温：140℃；气化温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：氮气（色谱纯）；流速：35.5 mL/min；分流比：40∶1；进样量：1 μL。 结果 羚羊清肺颗粒中冰片称样量在1.85～11.13 mg范围内呈良好的线性关系，平均回收率在97.71%～101.24%之间，RSD为1.35%（n=6），符合《中国药典》2010年版一部规定，其他方法学考查均符合《中国药典》2010年版一部规定。 结论 本研究所采用的气相色谱法操作快速、简便、易行，精密度、重复性、稳定性好，可用于羚羊清肺颗粒中冰片的含量测定。

[关键词] 羚羊清肺颗粒；冰片；气相色谱法；含量测定

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）09（b）-0081-03

羚羊清肺颗粒是在原散剂的基础上将其改变成颗粒，属中药新药第9类，具有清热泻火、凉血解毒、化痰息风等功能，用于温热病、高热神昏、烦躁口渴、惊厥抽搐及小儿肺热咳嗽等[1]。本品由羚羊角、金银花、冰片等十八味中药组成，由于方中药味较多，所含成分复杂，对本品的质量控制带来诸多不便。由于冰片为方中主要药物，所含标志性成分为右旋龙脑，其含量常被作为冰片的主要质量控制指标[2]，并在制剂中视为冰片含量。右旋龙脑分子式为C10H18O，具有挥发性[3]，故采用气相色谱法对冰片进行限量测定[4-6]，以控制本品质量，保证临床用药的安全、准确和有效。

1 仪器与试药

H5890气相色谱仪检测器：FID。

对照品：冰片，由中国药品生物制品检定所提供，批号：110743-201303，纯度含量> 98.5%，；样品：羚羊清肺颗粒（沈阳天益堂中药厂）；正十五烷（色谱纯）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP20M（30 m×0.32 mm×1.0 μm）（PEG20M）；柱温：140℃；气化温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：氮气（色谱纯）；流速：35.5 mL/min；分流比：40∶1；进样量：1 μL。

2.2 测定指标与测定方法的确立

本品由羚羊角、冰片、芦根、栀子、连翘、甘草、金银花、知母等十八味中药加工制成，冰片在方中用量为62 g，含量较高，所以选用冰片为含量测定指标，采用气相色谱法，以正十五烷为内标，对本品进行含量测定。

2.3溶液的制备

2.3.1 内标溶液的制备 参考《中国药典》2010年版一部[7]冠心苏合丸含量测定项下内标物的制备方法，取正十五烷适量，用醋酸乙酯溶解并制成每毫升含5.004 mg的溶液，作为内标溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 确定取本品适量，精密称取适量，置具塞试管中，精密加入内标溶液1 mL与醋酸乙酯4 mL，密塞，振摇使冰片溶解，静置，取上清液为供试品溶液[8]。

2.3.3 阴性溶液的制备 取除去冰片以外的其他药材，按供试品制备方法制成阴性溶液。

2.4 系统适用性试验考察

参考《中国药典》2010年版一部[7]冠心苏合丸项下的含量测定方法进行试验。色谱条件为色谱柱：HP20M（30 m×0.32 mm×1.0 μm）（PEG20M）；柱温：140℃；气化温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：氮气（色谱纯）；流速：35.5 mL/min；分流比：40∶1；进样量：1 μL，并以正十五烷为内标，可满足气相色谱测定的要求，理论塔板数按正十五烷计算应不低于1200。

2.5 线性关系的考察

精密称取冰片对照品1.85、3.23、5.94、8.57、11.13 mg，置5 mL量瓶中，按“2.4”项下含量测定方法加入正十五烷内标物，分别精密量取1 μL注入气相色谱仪[9]，进行测定，以进样量为横坐标，冰片峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线[10]，计算回归方程，回归方程为：Y=0.205 152X+0.001 75（r=0.9999）。测定结果显示，冰片称样量在1.85～11.13 mg范围内呈良好的线性关系。

2.6 校正因子的测定

取上述测定标准曲线不同浓度的供试品溶液，照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D内标法测定校正因子，按“2.4”项下含量测定方法加正十五烷内标物[11]，分别精密量取1 μL注入气相色谱仪，进行测定，F的平均值为0.9759，RSD为0.37%（n=5）。

2.7稳定性试验

取本品1 g，倾出内容物，研细，按“2.3.2”项下方法制备供试液，精密取同一供试液，按0、3、6、9、12 h时间间隔，分别进样分析[12]，测定冰片的含量的RSD为0.84%（n=5），表明供试液在12 h内性质稳定。

2.8 精密度试验

取本品l g，倾出内容物，研细，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取1 μL，连续进样5次，测定其冰片的含量[13]。计算其冰片和内标物RSD分别为0.52%（n=5）和1.76%（n=5）。

2.9 重现性试验

取5份（批号130805）样品各lg，倾出内容物，研细[8]，按“2.5”项下方法分别测定，测定其冰片含量的RSD为0.54%（n=5）。

2.10 回收率试验

精密称取已知含量的6份，分别加入内标溶液1 mL和冰片对照品溶液4 mL（浓度为0.625 16 mg/mL），按“2.4”项下含量测定方法测定[14]，结果显示其样品回收率在97.71%～101.24%之间，RSD为1.35%（n=6）。见表1。

2.11 阴性干扰试验

精密吸取供试品溶液、阴性液、对照品溶液各1 μL，分别注入气相色谱仪中，绘制气相色谱图，由色谱图提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，对本品中冰片的含量测定无干扰，方法专属性良好，气相色谱图见图1～3，气相色谱测定结果见表2、3、4。

3 讨论

冰片是羚羊清肺颗粒的重要有效成分之一，先采用高效液相色谱法测定时干扰较大，又因冰片具有挥发性，因此选用气相色谱法测定冰片含量，在本实验拟定色谱条件下异龙脑与龙脑可达到完全分离。本法简便、灵敏、快速、准确，可作为羚羊清肺颗粒中冰片的质量控制方法。

中成药成分复杂，组分比较多，在测定过程中易污染色谱柱，影响仪器的稳定性和灵敏度，实验发现在每次测定完后将柱温适当升高，避免由于杂质峰污染柱子所带来的干扰，且样品测定数据稳定，重现性好。

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（收稿日期：2014-03-17 本文编辑：卫 轲）