自育小菊热处理结合微茎尖培养脱毒技术研究

摘要 以自育小菊为材料，在@取无菌组培苗的情况下，将组培苗进行30 d的变温热处理后，在生物解剖镜下剥取茎尖大小为0.1～0.3、0.3～0.5、0.5～0.8 mm 3种不同的规格，接种于未添加任何激素的MS培养基中培养。结果表明，自育小菊培养30 d后相应的成活率分别为16.7%、40.0%和63.3%。经过病毒检测，当剥取的茎尖大小在0.1～0.3 mm时，可100%脱除病毒，并随着剥取茎尖的变大，脱毒效果也变差。

关键词 自育小菊；热处理；微茎尖培养；脱毒

中图分类号 S682.1+1；S336 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）08-0140-02

目前，生产过程中存在的主要问题是病毒感染造成的品种退化。我国常见的病毒有8种，病毒的危害会造成产量降低、植株矮化，大大降低商品价值[1]，并进一步影响进出口贸易。病毒病害防治困难，一旦侵染，危害严重，给从事生产的工作者带来巨大损失[2]。为了提高商品产出率和保持优良品种的特性，快速有效的脱毒技术是根除病毒危害获得脱毒苗的有效方法。近年来，随着业界对扦插繁殖种苗的品质要求不断提高，脱毒种苗已成为行业标准和发展趋势及亮点。

为提高种苗的品质和产量，本文针对自育的盆栽小菊新优品种，采用了“热处理结合微茎尖培养脱毒法”对脱毒技术进行了研究，取得了良好的效果。

1 材料与方法

1.1 试验材料

自育盆栽小菊新品种，编号分别为34X-212、39W-146、39X-75、30X-67、33X-139。所用病毒种类为CVB、TMV、INSV。

1.2 试验方法

1.2.1 植物材料。将待脱种材料获得的无菌组培瓶苗（图1），置于光照培养箱中，温度为38 ℃，光照处理14 h；再在温度为30 ℃下，黑暗处理10 h，连续处理30 d。然后，将经过热处理的植株在40倍解剖镜下，无菌操作剥取微茎尖，茎尖大小为0.1～0.3、0.3～0.5、0.5～0.8 mm 3种不同的规格，每种规格60个茎尖，剥取后接种于未添加任何激素的MS培养基中进行培养。培养条件为温度（24.0±0.5）℃、光照强度1 000 lx，持续14 h，培养30 d统计成活情况。

1.2.2 病毒检测。将培养成活的微茎尖培养到株高3 cm左右、有3个以上展开叶片时，取3种不同规格的微茎尖培养所得植株各30株，用ELISA酶联免疫法进行病毒脱毒效果的检测。

2 结果与分析

2.1 热处理脱毒

待脱毒的无菌瓶苗经过30 d的变温热处理，植株的叶片大多数已老化变黄（图2），芽的生长受到抑制，基本处于停滞状态，但仍具有活性。

2.2 茎尖剥离脱毒（微茎尖培养）

由表1、2可知，剥取的茎尖越大，其培养成活率越高，越小则成活率越低。同时，茎尖成活率与品种特性也有一定关系，有的品种容易成活，有的品种则随着茎尖变小，成活率明显下降。

由表1可知，不同的品种茎尖成活情况不同，并且在培养过程中生长速度也有所不同。0.3～0.5 mm茎尖及苗的生长状况见。

由表2可知，不同大小茎尖的成活情况不同，同一品种茎尖越小成活率越低。当茎尖小于0.3 mm时，成活率明显下降；相反，茎尖越大，成活率越高。当茎尖大于0.5 mm时，茎尖成活率明显增高。

2.3 病毒检测（脱毒效果）

由表3可知，用ELISA酶联免疫检测法，对菊B病毒（CVB）、烟草花叶病毒（TMV）和凤仙花坏死斑点病毒（INSV）3种生产中最常见的病毒进行检测，发现剥取的茎尖越小，脱毒率越高，脱毒效果越好；反之，剥取的茎尖越大，脱毒率约低，脱毒效果越差。

当剥取的茎尖小于0.3 mm时，可100%脱除病毒；当茎尖大小为0.3～0.5 mm时脱毒率在83%以上；而当茎尖大于0.5 mm时，脱毒效果明显变差，只有不到30%的茎尖能够脱除病毒。

3 结论与讨论

在生产应用中进行脱除病毒时，剥取的茎尖越小，其脱毒效果越好[3]。但随着剥离茎尖的缩小，成活率就会相应降低[4]，剥取的操作难度也增大。另外，病毒的特点不同，脱除的难易程度也不同。要根据病毒的特性以及植物材料品种的特点，结合需求确定需要剥取的茎尖大小以及数量，以保证兼顾成活率和脱毒效果[5-6]。

4 参考文献

[1] 胡军荣.的脱毒与快繁技术[J].安徽农学通报，2008，14（5）：142.

[2] 赵霜，李青，时颂.不同处理方法对‘神马’脱除病毒的影响[J].东北林业大学报，2013，41（3）：103-106.

[3] 曹孜义，刘国民.实用植物组织培养技术教程[J].兰州：甘肃科学出版社，1996.

[4] 丁文雅.植物组织培养脱毒技术与检测方法[J].农业科技通讯，2009（3）：75-77.

[5] 郭倩楠，张文芳，贾小玉，等.病毒脱除及其检测技术研究进展[J].浙江农业科学，2016（12）：2035-2039.

[6] 毕伟，董慧慧，李顺凯.植物组培脱毒技术及其在花卉上的应用[J].山东林业科技，2007（5）：102-104.