化疗联合参附注射液对急性白血病患者T淋巴细胞亚群、白介素-6、肿瘤坏死因子-α的影响

[摘要] 目的：探讨化疗联合参附注射液对急性白血病患者T淋巴细胞亚群、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，进一步分析其治疗急性白血病的免疫机制。方法：将我院2008年1月～2010年1月收治住院治疗的30例急性白血病患者采用化疗联合参附注射液治疗，设为治疗组，另选同期30例急性白血病患者仅给予化疗治疗，设为对照组。应用流式细胞仪测定两组患者的T淋巴细胞亚群（CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分比，并计算CD4+T/CD8+T比值）以及采用ELISA方法检测两组血清IL-6和TNF-α水平。结果：治疗组总有效率为76.7%，对照组总有效率为56.7%，两组总有效率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗组和对照组治疗后的CD4+T、CD4+T/CD8+T[（31.30±6.25）%、（30.34±4.25）%、（1.08±0.16），（27.32±7.31）%、（29.25±6.18）%、（0.96±0.29）]均较治疗前[（25.43±7.14）%、（32.76±5.60）%、（0.81±0.25），（26.37±6.46）%、（31.52±4.74）%、（0.78±0.16）]明显升高，且治疗组上述指标较对照组变化更明显（P＜0.05）；两组CD8+T治疗前后变化不明显（P＞0.05）；对照组和治疗组的IL-6和TNF-α治疗后[（156.33±71.69）ng/L、（191.02±74.96）μg/L，（107.22±63.43）ng/L、（160.08±78.41）μg/L]均较治疗前[（295.98±84.69）ng/L、（1138.91±147.89）μg/L，（307.97±82.52）ng/L、（1122.13±145.64）μg/L]明显降低，且治疗组较对照组降低更明显（P＜0.05）。结论：化疗联合参附注射液能明显改善急性白血病患者的免疫功能状态且两者对造血干细胞和白血病细胞增殖和分化具有一定的调控作用。

[关键词] 急性白血病；化疗；参附注射液；T淋巴细胞亚群；白介素-6；肿瘤坏死因子-α

[中图分类号] R733.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）12（a）-084-03

The influence of chemotherapy combined with Shenfu Injection on the T-lymphocyte subsets, IL-6, TNF-α of patients with acute leukemia

YU Hongtao, WU Tao, HE Jinzhao, ZHANG Zhongqiang

The Second Department of Internal Medicine, the People's Hospital of Heyuan City, Guangdong Province, Heyuan 517000, China

[Abstract] Objective: To investigate the influence of chemotherapy combined with Shenfu Injection on the T-lymphocyte subsets, interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-α (TNF-α) of the patients with acute leukemia and the immune mechanisms in treating acute leukemia in further analysis. Methods: 30 patients with acute leukemia treated with chemotherapy and Shenfu Injection in our hospital from January 2008 to January 2010 were taken as treatment group and 30 patients with acute leukemia in the same time given chemotherapy alone were taken as control group; the T-lymphocyte subsets (CD4+T, CD8+T-lymphocyte percentage and the ratio of CD4+T/CD8+T) of the two groups were determined by flow cytometry, and the levels of serum IL-6 and TNF-α were detected by ELISA. Results: The total effective rate of the treatment group was 76.7%, the total effective rate of the control group was 56.7%, the difference was statistically significant between two groups (P＜0.05). After treatment, the level of CD4+T, CD4+T/CD8+T of treatment group and control group [(31.30±6.25)%, (30.34±4.25)%, (1.08±0.16); (27.32±7.31)%, (29.25±6.18)%, (0.96±0.29)] were significantly higher than before treatment [(25.43±7.14)%, (32.76±5.60)%, (0.81±0.25); (26.37±6.46)%, (31.52±4.74)%, (0.78±0.16)], the treatment group improved more significantly than the control group (P＜0.05); after treatment, the level of IL-6 and TNF-α in control group and treatment group [(156.33±71.69) ng/L, (191.02±74.96) μg/L; (107.22±63.43) ng/L, (160.08±78.41) μg/L] were significantly lower than before treatment [(295.98±84.69) ng/L, (1138.91±147.89) μg/L; (307.97±82.52) ng/L, (1122.13±145.64) μg/L], the treatment group was decreased significantly than the control group (P＜0.05). Conclusion: Chemotherapy combined Shenfu Injection can significantly improve immune function in patients with acute leukemia and they have some regulatory role for the proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells and leukemia cells.

[Key words] Acute leukemia; Chemotherapy; Shenfu Injection; T-lymphocyte subsets; Interleukin-6; Tumor necrosis factor-α

急件白血病是血液科的常见病、多发病，患者常出现细胞免疫功能低下，且应用各种不同的化疗方法及药物后，容易使患者的细胞免疫功能进一步降低，而化学后应用辅助药物治疗可促进患者细胞免疫功能的恢复。T淋巴细胞在细胞免疫中起着重要的调控作用，白血病患者表现为T淋巴细胞减少，T淋巴细胞亚群比例失调[1]。本研究旨在探讨化疗联合参附注射液对急性白血病患者T淋巴细胞亚群、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，进一步分析其治疗急性白血病的免疫作用机制，为临床治疗提供进一步的指导依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年1月～2010年1月在我院就诊的急性白血病患者30例作为治疗组，患者年龄在36～76岁之间，平均（48.5±3.7）岁。另选同期30例急性白血病仅给予化疗治疗的患者作为对照组，患者年龄在34～73岁之间，平均（47.1±2.5）岁。两组性别、年龄、分型等一般资料经统计学分析，差异无统计学意义，具有可比性（P＞0.05）。见表1。

1.2 治疗方法

两组均采用相同的化疗方案，治疗至少两周以后评价疗效。化疗前后查血液肝肾功能、心电图、尿常规。对照组采用单一化疗方案治疗急性白血病。治疗组在停化疗时开始使用参附注射液40～60 ml加入5% GS 250 ml中静脉点滴，每日1次，连用14 d。而治疗两周后复查血常规。化疗前常规给予昂丹司琼止呕，化疗过程中给予水化、碱化。观察患者的发热，齿龈、皮肤、黏膜出血现象及其他不良反应。

1.3 检测方法

①采集两组患者的外周静脉血3～5 ml，3 000 r／min离心10 min，取上层血清于-80℃冰箱保存待测。采用美国BD公司生产的流式细胞仪FACS Calibuv测定两组患者的T淋巴细胞亚群（CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分比，并计算CD4+T/CD8+T比值）。②采用ELISA方法检测两组血清IL-6和TNF-α水平。检测试剂盒购于日本MBL公司，检测过程严格按试剂盒说明书操作。

1.4 观察项目

观察比较两组的疗效，两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群水平的变化，血清IL-6、TNF-α的变化以及两组用药的安全性。

1.5 疗效评判标准

根据《血液病诊断及疗效标准》[2]评价疗效。完全缓解（CR）：临床症状消失，生活正常或接近正常；血象Hb≥100 g／L（男）或≥90 g／L（女），中性粒细胞绝对值≥1.5×109／L，PLT≥100×109／L，外周血分类无白血病细胞；骨髓像为原+幼稚淋巴细胞≤5%，或原+幼粒细胞≤5%，或原+幼稚单核细胞≤5%；红细胞和巨核细胞系列正常。部分缓解（PR）：骨髓像为原+幼稚淋巴细胞＞5%，但＜20%，或原+幼稚粒细胞＞5%，但＜20%，或原+幼稚单核细胞＞5%，但＜20%；或临床症状、血象中有一项未达CR者。未达CR或PR者为未缓解，CR和PR者之和为缓解。

1.6 统计学方法

采用SPSS 12.0软件进行统计学分析，计数资料比较采用χ2检验，计量资料采用均数标±准差（x±s）表示，组间及组内比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗后临床疗效比较

治疗组总有效率为76.7%，对照组总有效率为56.7%，两组总有效率比较，差异有统计学意义（χ2=8.346，P＜0.05）。见表2。

2.2 两组治疗前后T淋巴细胞亚群水平变化比较

治疗组和对照组治疗后的CD4+T、CD4+T/CD8+T均较治疗前明显升高。与对照组上述指标比较，治疗组改善的更明显，两组治疗后比较差异有统计学意义（P＜0.05）。两组的CD8+T治疗后较治疗前无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 两组治疗前后T淋巴细胞亚群水平变化比较（x±s）

2.3 两组治疗前后血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α变化比较

治疗组和对照组治疗后两组的IL-6和TNF-α均较治疗前明显降低，差异有高度统计学意义（P＜0.01），且与对照组治疗后比较，治疗组降低的更明显，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

2.4 两组不良反应比较

两组在治疗期间未见明显不良反应发生，肾功能均正常，出现肝损害患者经对症处理均好转。

3 讨论

急性白血病患者本身免疫功能低下，化疗是临床治疗白血病的常规手段，但是化疗对细胞的免疫功能有明显的抑制作用。因此，在化疗结束后应用辅助药物可以使患者的细胞免疫功能有明显的改善[3]。

急性白血病患者T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平，能直接反映患者细胞的免疫功能。CD4+是辅T细胞的代表，CD8+是抑制性T细胞的代表。CD4+/CD8+值是机体免疫调控网络的重要枢纽，生理状态下CD4+和CD8+之间始终保持动态平衡，调节机体的免疫状态[4]。TNF-a主要由脂多糖（LPS）或卡介苗（BCG）活化的单核巨噬细胞产生，具有抗肿瘤、抗病毒的作用，也是重要的免疫调节分子和致炎因子[5]。IL-6通常以Th2细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞产生为主，可以促进B细胞分化成熟，还可以刺激造血干细胞增生分化，参与炎症反应。化疗后急性白血病患者IL-6分泌水平明显降低，说明化疗后白血病患者处于免疫功能抑制状态。因此，积极寻找有选择性杀伤及免疫调节药物成为治疗白血病研究的重要课题[6]。

参附注射液由人参、附子的提取物组成，有调中益气、实卫固脱的作用，益肺健脾，补气养血，激活骨髓造血功能，减少细胞破坏作用，能减轻化疗对骨髓功能的抑制，使白细胞恢复时间缩短，降低白细胞、血小板减轻程度[7]。

本组资料结果显示，治疗组30例急性白血病患者在化疗的同时应用参附注射液后，治疗组和对照组治疗后的CD4+T、CD4+T/CD8+T均较治疗前明显升高，且治疗组上述指标改善较对照组更明显，说明其能改善急性白血病患者的免疫功能；同时，治疗组和对照组治疗后IL-6、TNF-α水平明显降低，且治疗组降低程度明显低于对照组，说明参附注射液可通过影响急性白血病患者体内IL-6、TNF-α的表达水平，进一步干预二者对造血干细胞和白血病细胞增殖和分化的调控作用，从而达到治疗的目的，与魏影非等[8]所报道的研究结果基本一致，但由于样本量过小，对其机制仍需要扩大样本量进一步研究。

[参考文献]

[1] 徐丽华.小儿急性白血病患者血清VEGF水平和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群水平检测的临床意义[J].淮海医药,2008,26(1):7-8.

[2] 张之南,沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].北京:科学出版社,2007:33.

[3] Brune M, Castaigne S, Catalano J, et al. Improved leukemia free survival after postconsolidation immunotherapy with histamine dihydro and chloride and interleukin-2 in acute myeloid leukemia: results of a randomized phase3 trial [J]. Blood,2006,108(32):88-96.

[4] Angulo DG, Yuen C, Palla SL, et al. Absolute lymphocyte count is a novel prognostic indicator in AL and AML: implications for risk stratification and future studies [J]. Cancer,2008,112(2):407-415.

[5] 李辉,吴雨洁,仇海荣.T淋巴细胞亚群结合遗传学检测在初发急性白血病中的相关研究[J].现代检验医学杂志,2010,25(2):84-85.

[6] 吴朝阳,吴雅荣,王法春,等.急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平检测及临床意义[J].江苏大学学报:医学版,2008,18(5):432-433.

[7] 谭琳,聂波,谢瑜.急性白血病患者化疗后应用白介素-2对T淋巴细胞亚群的影响[J].中国医学创新,2010,7(2):17-18.

[8] 魏影非,杜惠兰,王素云,等.参附注射液配合化疗治疗急性白血病疗效及对细胞免疫、血清IL-6和TNF-α水平的影响[J].中国中西医结合杂志,2003,23(4):258-259.

（收稿日期：2011-08-08）