在线净化液相色谱串联质谱法测定动物源食品中金刚烷胺的残留

摘要：建立了在线净化液相色谱串联质谱法测定动物源食品中金刚烷胺的残留。样品用甲醇1%三氯乙酸或乙腈提取，提取液用阳离子交换在线净化柱（ycloneMX）净化，%氨水甲醇溶液将分析物洗脱转入至apcellPakMG18分析柱，经色谱分离后，用串联质谱检测。方法的定量限（LOQ）牛奶为2μgkg，动物组织和鸡蛋为μgkg，在1～2μgL浓度范围内呈良好线性，线性相关系数大于999。方法在个水平的添加回收率为8%～96%，相对标准偏差在%～9%之间。方法简单快速，回收率高，重现性好，适用于动物源食品中金刚烷胺残留的定量及确证分析。

关键词：在线净化液相色谱串联质谱；金刚烷胺；残留；动物源食品

1引言

金刚烷胺是一种对称的三环状胺，可以抑制病毒穿入宿主细胞，并影响病毒的脱壳，抑制其繁殖，在临床上能有效预防和治疗各种A型流感病毒的感染，同时也是帕金森综合症的治疗药物。但金刚烷胺对食用者可能产生嗜睡、失眠、眩晕、抑郁、恶心、食欲减退等多种不良反应，具有一定的毒副作用。而且，长期使用金刚烷胺可以使病毒产生不同程度的耐药性，诱导产生新型耐药病毒。因此，我国农业部了《关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知》，规定除经批准生产、使用的疫苗产品外，禁止使用其它药物防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病。但目前我国畜禽饲养中滥用金刚烷胺现象严重，急需建立快速、灵敏、准确的动物源食品中金刚烷胺残留量的分析方法。

目前，检测金刚烷胺的方法有气相色谱质谱法（GM）＼[12＼]、液相色谱法（PL）＼[～7＼]和液相色谱质谱法LM＼[8～12＼]，方法多应用于生物体液和医药中金刚烷胺的检测＼[1～11＼]，而动物组织中金刚烷胺残留的检测方法较少＼[12＼]。L和GM均需要复杂的衍生处理过程，具有高选择性、高灵敏度特点的LM在金刚烷胺的检测具有一定的优势，但仍需要较好的前处理以降低LM的基质效应，尤其是对于复杂的动物组织样品。urbolow在线净化技术结合了扩散、化学和体积排除的原理，在捕获感兴趣分析物的同时，快速净化样品；与串联质谱联用，在简化样品前处理的同时保证了方法的灵敏度，是近年发展起来的一种新型联用检测技术，已在残留分析得到了较好的应用＼[1～1＼]。本研究采用该技术建立了动物源食品中金刚烷胺残留的检测方法，方法简单、快速，回收率稳定、灵敏度高，能够对低浓度的金刚烷胺进行定性与定量分析，已应用本实验室的日常检测工作。

2实验部分

21仪器与试剂

urbolow在线净化液相色谱串联质谱仪（美国hermoFisher公司），由多功能自动进样器（配有1μL定量环）、两个耐压12kPa的四元梯度液相泵、六通阀切换装置、多元柱切换装置和QQuantumUltra三重四极杆质谱仪组成。igmaK1型离心机美国igma公司，P21型均质器（瑞士Kinematica公司）。

甲酸、异丙醇、乙腈、丙酮和氨水为色谱纯，水经MilliQ纯系统处理（美国Millipore公司）。

盐酸金刚烷胺对照品，购于中国药品生物制品检定所。

22实验方法

221在线净化色谱条件在线净化程序主要为净化和分离过程，净化过程（）在上样泵驱动净化流动相在urbolow柱完成，分离过程PL是洗脱泵驱动分析流动相在分析柱上完成，整个程序通过两个六通阀切换实现流路的改变。的净化柱为ycloneMX柱mm×mm6μmParticlesize6poresize，流动相A为1mmolL乙酸铵01%乙酸溶液、为乙腈、为丙酮乙腈异丙醇（∶∶VV）、为%氨水甲醇溶液。进样量为μL。PL的分析柱apcellPakMG18柱1mm×21mm，μm；流动相A为%甲酸溶液，流动相为乙腈，其在线净化程序见表1，其中在程序中每步的变化采用瞬变模式，PL每步的变化除最后一步采用瞬变模式外其它步骤间改变采用渐变模式。整个运行时间为8min，在～7min切入质谱系统。