甘丙肽对鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白 4膜位移影响的研究

摘要:目的 对与甘丙肽是否促进鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4膜位移进行调查和探究。方法 用3H 标记葡萄糖，测量脂肪细胞葡萄糖的摄取率。选取体重、大小、鼠龄相似的大鼠80只，分成对照组（运动组与运动组）和观察组（运动组与不运动组），对照组注射生理盐水，观察组注射甘丙肽拮抗剂M35。结果 甘丙肽促进葡萄糖的摄取；观察组大鼠细胞外膜和总膜葡萄糖转运蛋白4浓度下降，且两者的比值小于对照组。结论 甘丙肽对于葡萄糖转运蛋白4膜转移具有促进作用，增加对胰岛素的敏感性。

关键词: 甘丙肽；脂肪细胞；葡萄糖转运蛋白4

甘丙肽是一种具有多种生物活性的化学物质，1983年被外国学者Tatemoto在猪的小肠上发现并成功提取的活性肽，它含有29个氨基酸残基，因为它的N-端与C-端与甘氨酸和丙氨酸的结构一样，所以被命名为甘丙肽。

1 资料和方法

1.1 基本资料

动物及分组：选取80只体重、大小、鼠龄相似的雄性健康wistar大鼠（由广西医科大学实验动物中心提供，合格证号：桂动许字（2000）第001号），按照随机分组的原则，平均分成4组，即对照组中分为运动组与不运动组，观察组中分为运动组与不运动组，每组20只大鼠。给予对照组大鼠腹腔内注射0.35mld生理盐水，而观察组大鼠注射3.5μmol・kg1・d1M35，连续进行20天。运动的大鼠每天游泳60min，游泳20天，水温为（32.9±1.8）℃。

主要试验仪器设备及试剂： 甘丙肽ELISA试剂盒购于南京建成生物工程公司；CO2细胞培养箱购于Thermo公司；培养基购于青岛海博公司；离心机购于北京时代北利（型号GT10-1）；安稳血糖仪购于长沙三诺生物传感技术公司。

1.2 方法

3H葡萄糖（2DG）摄取试验：按照有关文献的方法培养3T3L1脂肪细胞、摄取2DG，把分化成熟的脂肪细胞放在培养基上培养12小时，分为1、2、3组，1组加入甘丙肽，2组加入甘丙肽和甘丙肽拮抗剂M35,3组作为正常组不加入任何药物。以正常组葡萄糖摄取量为100%作为对照，对各个组的葡萄糖的摄取率进行分析与计算。

对脂肪细胞内膜和外膜葡萄糖转运蛋白4水平进行测定：使用改良的Klip方法将细胞的内、外膜分离，取用1.2g脂肪垫将其浸入溶液中，均匀浆液之后，进行20min3000g离心，上清液以125000g超离心20min后，上清液中加入TES缓冲液1.2ml，进行混合均匀，此时悬浮在上层的浑浊液就是细胞外膜，上清液进行20min 29000g离心，留取上清液，再以14500g进行75min离心，此时出现的沉淀物即为细胞内模。将取得的细胞外膜和细胞内模在低温下保存。取用45μg脂肪细胞外膜和脂肪细胞内膜，放置在聚丙烯酰胺胶上，进行分离后，将其转移到PVDF的膜上，利用脱脂奶粉进行密闭封严，再使用葡萄糖转运蛋白4进行抵抗孵育，再把它们洗脱，之后加入辣根过氧化物酶偶联Ⅱ抗，利用化学发光底物，使其显迹。对细胞外膜和细胞内膜的葡萄糖转运蛋白4水平进行检测。细胞总膜葡萄糖转运蛋白4的浓度是细胞外膜和细胞内膜的葡萄糖转运蛋白4浓度之和。

对血浆甘丙肽水平进行检测：在甘丙肽ELISA试剂盒的指示下进行操作。

1.3 数据的处理

采用SPSS16.0软件处理实验数据，计量资料用（?x±s）表示，用方差分析组间的显著性检验，用配对t检验比较实验前后的甘丙肽浓度，若P

2 结果

摄取葡萄糖的结果 1组即甘丙肽组的葡萄糖摄取率为124.24%，与3组即正常组进行比较，显著高于正常组，差异具有统计学意义（P

图表1 各个组脂肪细胞葡萄糖摄取率的比较（%）

血浆甘丙肽水平的结果 所有大鼠在实验前血浆甘丙肽的浓度差异无统计学意义（P>0.05），实验之后发生了显著变化。对照组中的运动组和观察组中的运动组、对照组中的安静组和观察组中的安静组，比较实验前后血浆甘丙肽浓度，P都

图表2 各个组血浆甘丙肽水平实验前后的比较

甘丙肽拮抗剂对脂肪细胞外膜和总膜葡萄糖转运蛋白4浓度的作用 各个组分别比较，P

3 讨论

2DG属于葡萄糖的类似物，葡萄糖转运蛋白4可以将其转入细胞，转化成不能被代谢的6-磷酸-2-脱氧葡萄糖，因此可以标记并测量葡萄糖的摄取率，该实验表明，甘丙肽使脂肪细胞的葡萄糖摄取率增加，而加入甘丙肽拮抗剂之后，此效应被拮抗，揭示了甘丙肽能够促进脂肪细胞摄取葡萄糖。实验结果表明，运动组鼠的血浆甘丙肽水平均比实验前安静对照组高，说明运动可以促进甘丙肽的释放。此外，观察组中的安静组和对照组的葡萄糖转运蛋白4均比其对照组低，而且细胞外膜葡萄糖转运蛋白4浓度与总膜浓度的比值也比其对照组低。说明甘丙肽拮抗剂降低葡萄糖转运蛋白4的浓度，能够促进葡萄糖转运蛋白4的膜位移。因此，除了胰岛素能够调节机体IS外，甘丙肽也是调节机体IS的重要激素。

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