时间：2022-01-11 10:18:13
作者：刘同祥,尚宝昌,陈富君,王继蜂
【摘要】 目的 建立阿胶补血口服液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法 采用hplc-elsd法,色谱柱：betasil c18 (4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相：甲醇-水(74∶26),流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；elsd参数：漂移管温度90 ℃,气体流量2.0 l/min。结果 黄芪甲苷在0.43～2.15 μg之间呈良好线性关,回归方程为：y=1.536 37x+0.921 58, r=0.999 9(n=6)；平均加样回收率97.98%,rsd=1.03%。结论 本方法准确、可靠、重复性好,可作为阿胶补血口服液的质量控制方法。
【关键词】 hplc-elsd；阿胶补血口服液；黄芪甲苷；含量测定
abstract：objective to establish a method for the determination of astragaloside ⅳ in ejiao buxue koufuye. methods hplc-elsd was used to determine directly astragaloside iv in ejiao buxue koufuye on betasil c18 column, using ch3oh-h2o (74∶26) as a mobile phase. the flow rate was 1.0 ml/min. the temperature of drift tube for elsd was 90 ℃ and the flow rate of n2 was 2.0 l/min. results the linear range of astragaloside ⅳ was 0.43～2.15 μg, y=1.536 37x+0.921 58, r=0.999 9 (n=6), the average recovery of the added sample was 98.5% and rsd=0.98%. conclusion the method is accurate and reliable with a good reproducibility. it can be used for the quality control of ejiao buxue koufuye. key words：hplc-elsd；ejiao buxue koufuye；astragaloside ⅳ；determination 阿胶补血口服液为中药复方制剂,由黄芪、阿胶、熟地黄、党参、枸杞子、白术组成,具有滋阴补血、补中益气、健脾润肺之功,用于久病体虚、血亏目眩、虚痨咳嗽等症[1]。黄芪为方中主药,现代药理研究表明,黄芪具有增强免疫、抗疲劳、促进代谢等功用,而黄芪的活性成分主要为皂苷类,黄芪甲苷又是其主要活性成分之一。本试验采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(hplc-elsd)法,对阿胶补血口服液中黄芪甲苷的含量进行了研究,建立了方中黄芪甲苷的hplc-elsd含量测定方法。
1 仪器与试药
dionex高效液相色谱仪,asi-100自动进样器,altech 2000es型elsd检测器,chromeleon色谱工作站；十万分之一电子天平。黄芪甲苷对照品(批号0781-200109,购自中国药品生物制品检定所)；阿胶补血口服液(批号050501、050502、050503,河南省四方药业有限公司生产)。甲醇为色谱纯；水为双蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
betasil c18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水(74∶26)；流量：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；elsd漂移管温度90 ℃,气体流量2.0 l/min。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液20 μl注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图,理论塔板数以黄芪甲苷计不低于3 000,黄芪甲苷色谱峰与相邻峰的分离度不低于1.5,阴性对照溶液在黄芪甲苷峰位置处无干扰峰,黄芪甲苷与样品中其他组分色谱峰可完全分离(见图1)。2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品10.75 mg,置5 ml量瓶中,加甲醇溶解后稀释至刻度(黄芪甲苷对照品浓度2.15 mg/ml),摇匀,精密量取1 ml,于5 ml量瓶中加甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液(黄芪甲苷对照品浓度0.43 mg/ml)。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取本品10 ml,用正丁醇萃取3次,每次10 ml,合并正丁醇液,加入氨试液2次,每次20 ml,弃去氨试液层,合并正丁醇液层,水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至5 ml,作为供试品溶液。取缺黄芪阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,以进样量的常用对数为横坐标,峰面积的常用对数为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：y=1.536 37x+0.921 58,r=0.999 9(n=6)。结果显示,黄芪甲苷在0.43～2.15 μg之间呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液30 μl,注入液相色谱仪,连续进样5次,测定黄芪甲苷的吸收峰面积,rsd=1.37%(n=5)。
2.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液20 μl,在0、1、2、5、24 h分别注入液相色谱仪,测定黄芪甲苷峰面积,rsd=1.067%(n=5),表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重现性试验
取同一批样品(批号050501),重复测定5次,结果平均含量为0.02953 mg/ml,rsd=0.13%。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的样品(批号050501,0.029 53 mg/ml),量取6份,每份10 ml,分为3组,每组2份,分别精密加入浓度为0.430 mg/ml的黄芪甲苷对照品0.8、1.0、1.2 ml,按上述方法测定其含量,并计算加样回收率,平均回收率为97.98%,rsd=1.03%。结果见表1。 表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
分别精密吸取对照品溶液2、5 μl,供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,测定,并以外标两点法对数方程计算含量,结果见表2。表2 样品测定结果(略)
3 讨论
黄芪甲苷含量测定一般采用薄层扫描法[2]、高效液相色谱 -蒸发光散射检测器(hplc-elsd)[3]、高效液相色谱-紫外检测器法[4-5]、hplc-示差折光检测法[6],还有用柱前衍生化高效液相色谱-紫外检测器进行测定[7]。黄芪甲苷无特征紫外吸收,仅在200 nm处有弱的末端吸收,需采用紫外末端波长检测,对溶剂要求较高,测试成本昂贵；且在其它皂苷类成分的存在时,干扰严重,分离度下降,重现性差,很难利用hplc-uv联用测定黄芪甲苷含量。采用蒸发光散射检测器检测,则克服了上述不利因素,具有专属性强、灵敏度高、不受杂质成分干扰等优点。因此,本实验采用hplc-elsd的方法,测定方中黄芪甲苷的含量。
方法学考察结果表明,hplc-elsd联用测定黄芪甲苷含量重现性好,回收率高,方法准确可靠,可用于阿胶补血口服液的质量控制。
【参考文献】
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